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Luna C18及Luna系列色譜柱的保養和使用技巧

更新時(shí)間:2021-05-11      點(diǎn)擊次數:7541

一般信息

Phenomenex制造每個(gè)Luna色譜柱都是單獨制備和測試的。每根色譜柱均有一份質(zhì)量保證(CQA)證書(shū),其指示檢測條件,運行參數,和色譜柱的信息。該色譜柱的詳細信息,包括規格和性能測試結果應被輸入到信息管理系統,方便跟蹤和參考。您還可以從以下網(wǎng)站獲取質(zhì)量文檔的電子副本。

檢查

收到色譜柱后,請確認您收到的色譜柱是您訂購的色譜柱(即尺寸,粒徑,介質(zhì))。此外,請檢查色譜柱是否在運輸過(guò)程中可能造成任何物理?yè)p壞。立即測試色譜柱以驗證性能并將測試結果記錄在色譜柱信息管理系統中。

???色譜柱特

*在梯度條件下的pH穩定性。在等度條件下,pH穩定性為1.5-10。

*在梯度條件下,pH范圍為1.5-9。在等度條件下,pH范圍為1.5-10。

運輸溶劑

除非在色譜柱標簽上另有說(shuō)明,否則Luna CN和NH 2色譜柱以乙腈/己烷(1:99 v / v)裝運。Luna SCX色譜柱以150 mM 磷酸銨(pH 6.0)裝運,Luna HILIC色譜柱以HILIC條件(乙腈/ 100 mM甲酸銨pH 3.2(90:10 v / v))裝運。所有其他Luna固定相均已裝運乙腈/ H2O(65:35 v / v)。

典型流量,背壓,溫度:

以下是Luna HPLC和UHPLC色譜柱通用尺寸的一些典型值。這些數字不是絕對值,并且會(huì ) 根據液相色譜系統,運行參數和樣品分析物/基質(zhì)而有所不同。下面的值是使用乙腈和的溶劑系統創(chuàng )建的。

典型流速(與粒徑無(wú)關(guān)):

                  1、內徑4.6 mm時(shí)為1.0 mL / min

                  2、內徑2.1 mm時(shí)為0.2-0.6 mL / min

最大背壓:

                 ? 3、1.6um>15,000psi(1034bar)可能損害柱壽命。

                 ? 4 、3μm或5μm > 5000 psi(345 bar)可能會(huì )損害色譜柱的壽命。

最高溫度:

                 ? 5、Luna色譜柱推薦最高溫度是60℃,但溫度范圍依賴(lài)于你的運行參數。

                 ? 6、在最高溫度極限下連續使用Luna色譜柱可能會(huì )損害色譜柱的使用壽命。

                 ? ?7、基于常見(jiàn)的流動(dòng)相擴大了Luna Omega相的溫度使用范圍:

                               a.甲酸:90°C(C18,Polar C18),80°C(PS C18)

                               b.三氟二酸:80°C(C18,Polar C18), 60°C(PS C18)

                               c. pH 7.5磷酸鹽緩沖液:50°C(C18), 30°C(Polar C18),50°C(PS C18)

                               d. pH 8.5的碳酸氫銨緩沖液:50°C(C18),30°C (Polar C18),50°C (PS C18)

流動(dòng)相兼容性

當使用任何HPLC / UHPLC柱,一定要使用僅HPLC級溶劑和材料,同時(shí)也避免不混溶的溶

劑/緩沖溶液。

此外,強烈建議使用溶劑過(guò)濾來(lái)從您選擇的流動(dòng)相中除去痕量雜質(zhì)。以下Luna系列色譜柱在

100%水性條件下穩定:Polar C18,PS C18,PFP( 2)和SCX。所有Luna色譜柱在100%

有機條件下均穩定,但請確保流動(dòng)相的pH值不超過(guò)各個(gè)固定相的限值。有關(guān)各個(gè)Luna固定

相pH限值的信息,請參見(jiàn)色譜柱特征部分中的圖表。

 

色譜柱安裝

LC系統的初始設置對于確保色譜柱性能非常重要:

確保您的液相色譜系統已準備就緒:

1.密封管路,進(jìn)樣口清潔

2.流動(dòng)相管路無(wú)干線(xiàn)或氣泡

3.穩定的基線(xiàn)

4.一致的壓力

用流動(dòng)相沖洗液相色譜系統泵和管線(xiàn)(HPLC級,可與色譜柱附帶的溶劑混溶)。

流動(dòng)相起始條件檢查清單:

1.在使用前,請確保HPLC級流動(dòng)相充分混合,過(guò)濾和脫氣。

2.確保色譜柱運輸溶劑,液相色譜系統中剩余的溶劑和流動(dòng)相溶劑可混溶。

將流速設置為0.1 mL / min(對于2.1-4.6 mm內徑),并安裝色譜柱,確保箭頭指向流動(dòng)方向。然后將流速增加至0.2 mL / min(2.1mm 內徑)或1.0 mL / min(4.6 mm 內徑)5-10分鐘。將溶劑收集在一個(gè)小燒杯中。

停止流動(dòng) ,并擦拭出口端的柱 ,以除去任何顆粒連接到前檢測器。

將配件/管安裝到出口端,并在監測背壓的同時(shí)以低流量(?0.2 mL / min)運行至少10個(gè)色譜柱體積。

1.穩定的壓力應表示流量恒定,而壓力波動(dòng)則表示系統中有空氣。

2.在壓力寬波動(dòng)可能沖擊和損壞列,以便監視它的重要壓力。

監測壓力以及檢測器發(fā)出的信號,當兩者穩定后,就可以使用色譜柱了。

測試色譜柱性能

測試色譜柱性能時(shí),請使用制造商認可的測試混合物。

色譜柱清洗

色譜柱清洗

反相:

   用接近系統上最后一個(gè)溶劑系統的梯度進(jìn)行清潔:

典型的裝載能力

例如,如果最后一次進(jìn)樣以緩沖液/乙腈(75:25)結尾,則更合適的方法是從95:5 H 2 O /  乙腈開(kāi)始,然后根據需要逐步移動(dòng)以增加

有機物含量(即75:25 H 2 O /乙腈50:50 H 2 O /乙腈5:95 H 2 O /乙腈)。

   對于疏水性或油性材料,請嘗試用二氯甲烷沖洗 。

或IPA。使用IPA時(shí),請確保使用低流量以防止由于較高的溶劑粘度而導致較高的背壓。

   對于疏水性很強的材料,請嘗試使用THF 。

正常階段:

   用10倍柱體積的氯仿,IPA和/或二氯甲烷進(jìn)行沖洗。

   然后用流動(dòng)相進(jìn)行調節。

Tips:

   清潔時(shí),將流速設置為低于方法流速 。

   特別是在嘗試使用甲醇或IPA進(jìn)行清潔時(shí)。

   較長(cháng)時(shí)間的清潔比增加更多的循環(huán)更有利。

   建議不要使用非常大量的THF,特別是如果系統有塑料管。如果管道是金屬,則用THF清洗是可以的。

   嘗試反向沖洗色譜柱;逆著(zhù)列標簽上箭頭的方向緩慢流動(dòng)。

柱再生

反相•   進(jìn)行與上述清潔相同的梯度沖洗,并在低流量下通宵過(guò)夜。

正相•   為了除水,請沖洗:

1.30毫升己烷中的2.5%2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸。

2.然后從上方用清洗方法沖洗色譜柱,以低流速過(guò)夜 。

柱存儲 

在保存之前,請確保您的色譜柱是干凈的,這一點(diǎn)非常重要。這包括去除緩沖液,鹽,樣品和離子對試劑。

推薦的存儲條件是:

   反相:乙腈/ H 2 O(65:35 v / v),可用甲醇代替乙腈。

   正相:100%己烷或IPA

   離子交換:100%甲醇

•   HILIC:乙腈/ H 2 O(80:20 v / v)

延長(cháng)色譜柱壽命的技巧

   利用樣品制備技術(shù),例如固相提?。ǖ貙?reg; -X SPE產(chǎn)品)或配件(PHENEX ™注射式過(guò)濾器) ,以不希望的污染物的噴射最大限度地減少到您的系統和柱。

   使用正確的保護柱或保護柱系統(SecurityGuard ™)幫助清除顆粒,以免污染 色譜柱。

   不要使色譜柱超載。注入合適的樣品濃度和體積。見(jiàn)圖表:典型 加載 容量

   在色譜柱的合適分離模式下工作 。有關(guān)每個(gè)固定相使用的典型模式,請參見(jiàn)列特性圖。

   將色譜柱存放在適當的溶劑中。

   溶劑通過(guò)從一個(gè)混溶相緩慢馴化正確地切換 溶劑 到 所述 其他 在 一個(gè) 低 流量: 0.1 毫升/分鐘 為 2.1 毫米 ID 和內徑4.6 mm時(shí)為0.5 mL / min。

保修

Phenomenex HPLC色譜柱保證達到規定的性能和質(zhì)量,并且不存在材料和工藝上的缺陷。如果您不滿(mǎn)意的任何理由,請致電PHENOMENEX售后技術(shù)部。我們將竭盡所能解決問(wèn)題,使您滿(mǎn)意。如果有必要退回該列,則必須先從Phenomenex獲得退回授權號。

免責聲明

新色譜柱應使用制造商推薦的測試混合物進(jìn)行測試,而先前使用的色譜柱應使用相同或合適的測試混合物進(jìn)行分析。記得重新平衡系統使用高純度的溶劑。切勿從一種溶劑變?yōu)椴换烊艿牧硪环N溶劑,而不要經(jīng)過(guò)可與兩種溶劑混溶的中間溶劑。這會(huì )損壞色譜柱。切勿將緩沖液/鹽不溶于第二種溶劑的溶液更改為緩沖液/鹽的溶液。同樣,這會(huì )損壞色譜柱。切勿嘗試卸色譜柱,這將使保修無(wú)效。

柱震蕩

小心處理色譜柱。請勿跌落或造成物理震動(dòng)。不要以高流量啟動(dòng)泵,而要在幾分鐘后逐漸增加流量。設置泵壓力極限,以在發(fā)生堵塞時(shí)保護色譜柱。這會(huì )產(chǎn)生空隙,將對色譜柱的性能產(chǎn)生不利影響。

感謝您的閱讀。若有色譜柱疑問(wèn)請咨詢(xún)飛諾美代理商:廈門(mén)廣晟達儀器設備有限公司

 

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